Ako vyčistiť 96-jamkovú PCR platňu s proteínovými zvyškami?

Ako dodávateľ96jamková doštička PCR, chápem dôležitosť udržiavania kvality a čistoty týchto základných laboratórnych nástrojov. Proteínové zvyšky na 96-jamkovej PCR platni môžu významne ovplyvniť presnosť a spoľahlivosť výsledkov PCR. V tomto blogovom príspevku sa podelím o niekoľko účinných metód na čistenie 96-jamkovej PCR platne s proteínovými zvyškami.

Pochopenie problému proteínových zvyškov

Proteínové zvyšky sa môžu hromadiť na povrchu 96-jamkovej PCR platne počas rôznych laboratórnych postupov. Tieto zvyšky môžu interferovať s následnými PCR reakciami väzbou na priméry, templáty alebo enzýmy, čo vedie k falošne pozitívnym alebo falošne negatívnym výsledkom. Okrem toho môžu proteínové zvyšky tiež spôsobiť krížovú kontamináciu medzi studňami, čo je hlavným problémom pri vysokovýkonných aplikáciách PCR.

Úvahy o predčistení

Pred začatím procesu čistenia je dôležité vziať do úvahy niekoľko predčistením. Najprv sa uistite, že nosíte vhodné osobné ochranné prostriedky (OOP), ako sú rukavice a laboratórne plášte, aby ste zabránili potenciálnemu vystaveniu nebezpečným chemikáliám. Po druhé, identifikujte typ proteínových zvyškov prítomných na platni. Rôzne proteíny môžu vyžadovať rôzne čistiace prostriedky a metódy. Napríklad niektoré proteíny môžu byť odolnejšie voči určitým detergentom, zatiaľ čo iné môžu byť ľahko odstránené špecifickými enzymatickými úpravami.

Metódy čistenia

1. Čistenie na báze čistiaceho prostriedku

Čistenie na báze detergentu je jednou z najbežnejších metód na odstránenie proteínových zvyškov z 96-jamkových PCR platní. Tu je návod krok za krokom:

• Pripravte čistiaci roztok: Zvoľte jemný prací prostriedok, ktorý je vhodný na laboratórne použitie. Bežnou voľbou je neiónový čistiaci prostriedok, ako napríklad Tween 20 alebo Triton X - 100. Pripravte si 0,1 % - 1 % roztok čistiaceho prostriedku v deionizovanej vode.
• Namočte tanier: Ponorte 96-jamkovú PCR platničku do čistiaceho roztoku aspoň na 30 minút. Môžete použiť dostatočne veľkú nádobu, aby sa do nej zmestila a aby boli všetky jamky úplne ponorené.
• Pretrepte tanier: Počas procesu namáčania platňu jemne pretrepte, aby ste zvýšili čistiaci účinok. Na dosiahnutie tohto cieľa môžete použiť šejker alebo tanierový mixér.
• Opláchnite tanier: Po namočení vyberte platňu z roztoku čistiaceho prostriedku a dôkladne ju opláchnite deionizovanou vodou. Uistite sa, že ste každú jamku niekoľkokrát vypláchli, aby ste odstránili všetky stopy čistiaceho prostriedku.
• Vysušte tanier: Platničku umiestnite do čistého a suchého prostredia, aby sa vysušila na vzduchu. Nepoužívajte papierové utierky alebo iné materiály, ktoré môžu na tanieri zanechať vlákna.

2. Enzymatické čistenie

Enzymatické čistenie je ďalšou účinnou metódou na odstránenie zvyškov bielkovín. Enzýmy dokážu špecificky rozložiť bielkoviny na menšie peptidy a aminokyseliny, čo uľahčuje ich odstránenie. Tu je postup, ako vykonať enzymatické čistenie:

• Vyberte si vhodný enzým: Vyberte enzým, ktorý je vhodný pre typ proteínových zvyškov na tanieri. Napríklad trypsín je bežne používaný enzým na trávenie mnohých typov bielkovín.
• Pripravte roztok enzýmu: Pri príprave roztoku enzýmu postupujte podľa pokynov výrobcu. Zvyčajne sa enzým rozpustí v tlmivom roztoku vo vhodnej koncentrácii.
• Pridajte roztok enzýmu na platňu: Napipetujte roztok enzýmu do každej jamky 96-jamkovej PCR platne. Uistite sa, že ste každú jamku úplne vyplnili.
• Inkubujte platňu: Inkubujte platňu pri optimálnej teplote a čase pre aktivitu enzýmu. Pre trypsín sú typické inkubačné podmienky 37 °C počas 1 až 2 hodín.
• Opláchnite a osušte tanier: Po inkubácii platňu dôkladne opláchnite deionizovanou vodou, aby ste odstránili natrávené proteíny a roztok enzýmu. Potom platňu vysušte, ako je opísané vyššie.

3. Čistenie na báze kyseliny

Čistenie na báze kyseliny sa môže použiť na odolnejšie zvyšky bielkovín. Mal by sa však používať opatrne, pretože kyseliny môžu poškodiť platňu, ak sa nepoužívajú správne. Tu je postup:

• Pripravte kyslý roztok: Bežnou kyselinou používanou na čistenie je kyselina chlorovodíková (HCl) alebo kyselina sírová (H2SO4). Pripravte zriedený roztok kyseliny (napr. 1M HCl alebo 0,5M H2SO4).
• Namočte tanier: Ponorte 96-jamkovú PCR platňu do kyslého roztoku na krátku dobu, zvyčajne na 10 - 15 minút. Nenamáčajte tanier príliš dlho, aby ste tanier nepoškodili.
• Opláchnite tanier: Ihneď po namočení vyberte platňu z roztoku kyseliny a dôkladne ju opláchnite deionizovanou vodou. V prípade potreby sa uistite, že ste neutralizovali všetku zvyšnú kyselinu opláchnutím zásaditým roztokom (napr. roztokom hydrogénuhličitanu sodného).
• Vysušte tanier: Vysušte platňu podľa popisu vyššie.

Overenie účinnosti čistenia

Po vyčistení 96-jamkovej PCR platne je dôležité overiť účinnosť čistiaceho procesu. Jedným zo spôsobov, ako to urobiť, je vykonať vizuálnu kontrolu platne pod mikroskopom alebo pomocou čítačky platničiek. Skontrolujte, či v jamkách nie sú zvyšky bielkovín alebo iné nečistoty. Ďalšou metódou je uskutočnenie PCR reakcie s použitím vyčistenej platne a porovnanie výsledkov s výsledkami získanými s použitím novej platne. Ak sú výsledky konzistentné, znamená to, že proces čistenia je účinný.

Skladovanie vyčistených tanierov

Keď je 96-jamková PCR platňa vyčistená a overené, že je čistá, mala by sa správne uskladniť, aby sa zabránilo opätovnej kontaminácii. Platničku skladujte v čistom a suchom prostredí, najlepšie v uzavretej nádobe alebo plastovom vrecku. Nevystavujte platňu prachu, vlhkosti alebo iným nečistotám.

Súvisiace produkty od našej spoločnosti

Okrem toho96jamková doštička PCR, naša spoločnosť ponúka aj ďalší kvalitný laboratórny spotrebný materiál, ako naprPCR 12 - STRIPS TUBEaDoska Elisa 96 Well. Tieto produkty sú navrhnuté tak, aby vyhovovali rôznym potrebám PCR a iných laboratórnych aplikácií.

Kontakt pre nákup a vyjednávanie

Ak máte záujem o naše produkty alebo máte akékoľvek otázky týkajúce sa čistenia 96 - jamkových PCR platní, neváhajte nás kontaktovať. Zaviazali sme sa poskytovať vám tie najlepšie produkty a služby. Náš tím odborníkov je vždy pripravený pomôcť vám pri vašej laboratórnej práci.

Referencie

1. Sambrook, J. a Russell, DW (2001). Molekulárne klonovanie: laboratórna príručka. Cold Spring Harbor Laboratory Press.
2. Ausubel, FM, Brent, R., Kingston, RE, Moore, DD, Seidman, JG, Smith, JA, & Struhl, K. (Eds.). (1995). Súčasné protokoly v molekulárnej biológii. John Wiley & Sons.